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                                                  IPHASE/匯智和源 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗熱點問題解答【下】

                                                  更新時間:2023-11-03      點擊次數:328

                                                  體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗常見問題與解答

                                                  —熱點問題—


                                                  第一題    一張玻片可觀察到200個中期分裂相嗎?如果不夠,該如何處理?

                                                  大多數情況下,一張玻片很難找到200個可用于分析的中期分裂相,建議同一個劑量組多制作一些玻片,本公司一個劑量組通常會制作至少4張玻片,以保證足夠中期分裂相細胞可供分析。


                                                  第二題    如何辨別細胞是否處于中期分裂相?

                                                  中期分裂相細胞染色體數目、形態比較固定,染色體包含兩條染色單體,具體見下圖:

                                                  圖片1.png


                                                  第三題    有絲分裂指數測定的意義是什么?

                                                  中期分裂相指數是指所觀察的細胞中中期分裂相細胞的占比,是一項反映細胞增殖程度的指標。


                                                  第四題    油鏡如何使用?是否要將油鏡鏡頭整個浸入油中?

                                                  油鏡的使用需要搭配香柏油,香柏油與玻璃的折光率相近,光線穿過載玻片進入香柏油發生折射較少,而進入油鏡的光較多,視野較為明亮。油鏡使用時,需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中,并與玻片接觸,使用結束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭。


                                                  第五題    中期分裂相細胞少是什么原因導致?如何優化?

                                                  中期分裂相細胞少的原因如下:

                                                  (1)秋水仙素的劑量過小,作用時間過短;

                                                  (2)重懸時固定液量過大,細胞密度過低。


                                                  優化策略:

                                                  (1)秋水仙素劑量大,則作用時間短;

                                                  (2)秋水仙素劑量小,則適當延長作用時間,請選擇適宜的劑量和時間;

                                                  (3)根據細胞的收集量確定重懸體積;

                                                  (4)適當增加滴片的數量。


                                                  第六題    染色體聚集可能是由哪些原因導致?

                                                  染色體聚集的可能原因如下:


                                                  (1)秋水仙素用量過多,導致染色體的過度濃縮;

                                                  (2)低滲時間不足,導致染色體聚集在一起分散不開;

                                                  (3)細胞懸液未充分吹打均勻;

                                                  (4)載玻片未進行預冷,玻片表面張力不夠;

                                                  (5)滴片高度不夠。


                                                  第七題    染色體分散過度可能是由哪些原因導致?

                                                  染色體分散過度的根本原因就是細胞膜破裂。主要由以下可能:


                                                  (1)低滲時間過長;


                                                  (2)離心速度過高;


                                                  (3)細胞操作過程不注意,操作過度;


                                                  (4)滴片距離過高。


                                                  第八題    染色體畸變試驗閱片需要配套什么樣的顯微鏡?如何操作?

                                                  染色體畸變試驗使用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理細胞,使細胞停止在中期分裂相,此時染色體形態、數目都比較固定,使用普通生物顯微鏡即可進行染色體結構畸變觀察。先于低倍鏡下尋找背景清晰、分散良好、染色體收縮適中的中期分裂相細胞,再于油鏡下進行染色體畸變觀察并記錄。


                                                  第九題    玻片想要長期保存,需要如何處理?

                                                  如果玻片要長期保存,必須要做好封片(可使用中性樹脂膠并加蓋玻片),并置于陰涼干燥處保存。


                                                  發    文    章    得     獎    勵


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                                                  關    于    我    們


                                                  匯智和源,致力于為創新藥研發企業及生命科學研究機構提供高品質的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research"。


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